28圈加拿大-追求健康,你我一起成长

裸鼠成瘤实验过程：

 

1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。

2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，目的为去除细胞中残余的血清。

3、用PBS或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度，一般皮下瘤接种的细胞量为1-5x10^6个细胞/支，接种体积为0.1-0.2ml ，因此细胞悬液的浓度为1-5x 10^7个细胞/ml，如若有条件的实验室，也可以加基质胶以加速瘤块的生成，基质胶与PBS或无血清的比列为1:1。

4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成(如果接种量大，可以分批接种) ，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。

5、选择的裸鼠一般在4-6周龄，体重16-18g左右，种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部（我们常种在背部）。

6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率，导致小鼠接种细胞数量的差异过大。

7、接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，针头在皮下左右滑动几次，以便细胞接种成团，减少注射后细胞悬液从针眼溢出。

8、接种后3-6周左右可以见到皮下开始出现肿块。

9、根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量，一般皮 下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜生长过大，一般不要超过2000mm3。

10、肿瘤大小测量一般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。V= 1/2*a*b2 (a为长轴，b为短轴)。

 

样本收集

 

1、颈死法处死实验动物

2、固定好裸鼠后，打开皮肤，取出肿瘤块

3、放放在白纸上测量，一定要用直尺对应拍照，做好记录

4、拍好后放入准备好的冻存管，需要新鲜标本，可以放入冰盒中（记得2小时转移到液氮或者-80度冰箱）；如果想做细胞培养，尽快到细胞房做对应的处理；如果是做病理检测，可以放入装有多聚甲醛或者福尔马林的保存管中固定。